Introducción a las Técnicas de Microscopía: Óptica y Electrónica

Lunes 17 de julio de 2017. Dra. Mònica Roldán-Molina.

• 15:30 – 16:30

Fundamentos de microscopía y principios de óptica. Espectro electromagnético. Longitud de onda. Reflexión y refracción. Índice de refracción. Apertura numérica. Resolución. Lentes y aberraciones.

• 16:30 – 17:20

Microscopía óptica. Principios I. El microscopio óptico: Componentes mecánicos y ópticos. Aumento vs. resolución. Distancia focal y distancia de trabajo. Iluminación Köhler. Mantenimiento de los equipos.

• 17:20 – 17:50 Pausa para el café.

• 17:50 – 18:40

Microscopía óptica. Principios II. Tipos de iluminación. Microscopía de campo claro. Microscopía de campo oscuro. Contraste de fases. Luz polarizada. Contraste interferencial.

• 18:40 – 19:30

Preparación de muestras para microscopia óptica. Fijación y conservación de la muestra. Tinción de la muestra: Tinciones catiónicas, aniónicas y liposolubles; tinciones simples, diferenciales y selectivas. Inclusión y montaje de las muestras.

Martes 18 de julio de 2017. Dra. Mònica Roldán-Molina.

• 15:30 – 16:30

Microscopía de fluorescencia vs. Microscopía confocal. Propiedades de la fluorescencia. Microscopios de fluorescencia. Características de los fluorocromos. Características del microscopio confocal convencional y espectral. Aplicaciones de la microscopía confocal.

• 16:30 – 17:20

Captación de la imagen. Parámetros de captación. Captación en un plano de un solo fluorocromo. Captación en un plano de dos o más fluorocromos. Detección del solapamiento.

• 17:20 – 17:50 Pausa para el café.

• 17:50 – 18:40

Microscopía Confocal en 3D y análisis. Resolución de la imagen. Teorema de Nyquist. Procesamiento de imágenes. Reconstrucción 3D. Tipo de proyecciones.

• 18:40 – 19:30

Microscopía Confocal in vivo. Sistemas de incubación. Condiciones ambientales. Salud celular. Autofluorescencia. Fototoxicidad. Condiciones de captación. Marcaje en células vivas. Aplicaciones.

Miércoles 19 de julio de 2017.

• 10:00 – 12:00

Prácticas con Microscopio Electrónico de Barrido I (Dra. Emma Rossinyol-Casals).

• 12:00 – 14:00

Prácticas con Microscopio Láser Confocal Multifotón I (Dra. Mònica Roldán-Molina).

• 15:30 – 16:30

Preparación de muestras para fluorescencia (Dra. Mònica Roldán-Molina).
Tipos de fijación. Protocolos de marcaje (inmunofluorescencia, lectinas, FISH, Qdors, TSA, etc). Montaje de las muestras.

• 16:30 – 17:20

Técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia (Dra. Mònica Roldán-Molina).
Principios y aplicaciones de las técnicas F (FRET, FRAP, Fotoactivación y Fotoconversión); TIRF y sus aplicaciones; Multifotón y sus aplicaciones.

• 17:20 – 17:50 Pausa para el café.

• 17:50 – 18:40

Fundamentos de microscopía electrónica (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Interacción luz-materia. Óptica ondulatoria. Interferencia. Lentes electromagnéticas. Sistemas de vacío. Tipos de filamentos.

• 18:40 – 19:30

Microscopía electrónica de barrido (SEM) (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Tipos de columna y lentes. Detectores de imagen: Secundarios y retrodispersados. Espectroscopía por Dispersión de Rayos-X (EDS). Microscopios ambientales. Ejemplos y aplicaciones.

Jueves 20 de julio de 2017.

• 10:00 – 12:00

Prácticas con Microscopio Electrónico de Barrido II (Dra. Emma Rossinyol-Casals).

• 12:00 – 14:00

Prácticas con Microscopio Láser Confocal Multifotón II (Dra. Mònica Roldán-Molina).

• 15:30 – 16:30

Técnicas avanzadas de SEM (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Técnicas de bajo voltaje. Detectores de retrodispersados de alta sensibilidad. Sistemas de compensación de carga. Ejemplos y aplicaciones.

• 16:30 – 17:20

Microscopía electrónica de transmisión (TEM) (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Columna y lentes electromagnéticas. Aberraciones. Sistemas de detección. Cámaras CCD. Detectores analíticos.

• 17:20 – 17:50 Pausa para el café.

• 17:50 – 18:40

Preparación de muestras para SEM y TEM (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Metalizados: Sputtering y evaporados. Secado por punto crítico. Métodos de tinción. Pulido mecánico. Pulido electroquímico. Ultramicrotomía. Dispersiones de micro y nano estructuras.

• 18:40 – 19:30

TEM: Técnicas analíticas (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Electron Energy Loss Spectroscopy (EELS), Energy Filtered TEM (EFTEM) y High Angle Anular Dark Field (HAADF).

Viernes 21 de julio de 2017.

• 10:00 – 12:00

Prácticas con Microscopio Electrónico de Barrido III (Dra. Emma Rossinyol-Casals).

• 12:00 – 14:00

Prácticas con Microscopio Láser Confocal Multifotón III (Dra. Mònica Roldán-Molina).

• 15:30 – 16:30

Captación de la imagen en microscopía electrónica (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Modos de rastreo en SEM. Optimización de las imágenes. Brillo y contraste. Adquisición de la imagen en TEM. Resolución de la cámara CCD. Modos de adquisición. Programas de tratamiento de imágenes.

• 16:30 – 17:20

Análisis de materiales blandos mediante microscopía electrónica (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Estudio de polímeros. CryoTEM: Estudio de vesículas y estructuras en solución.

• 17:20 – 17:50 Pausa para el café.

• 17:50 – 18:40

SEM: Electron Backscattered Diffraction (EBSD) (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Fundamentos teóricos. Formación, interpretación e indexación de un patrón de difracción. Adquisición y análisis mediante el software Channel 5. Tipo de información que podemos obtener de una muestra. Condiciones experimentales. Ejemplos y aplicaciones.

• 18:40 – 19:30

Técnicas avanzadas de microscopía electrónica (Dra. Emma Rossinyol-Casals).
Focus Ion Beam (FIB). Microscopios de transmisión de alta resolución con corrección de aberraciones. Cryomicroscopios de alta resolución.